土壤谷an酰胺酶(solid-glutaminase, S- GLS) 活性測(cè)定試劑盒說明書

微量法 100 管/96 樣

土壤谷an酰胺酶活性測(cè)定試劑盒

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定測(cè)定意義：

GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等動(dòng)物和某些細(xì)菌以及植物根中，催化谷an酰胺水解成谷an酸和氨，在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用，尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。

測(cè)定原理：

S-GLS 催化谷an酰胺水解成L-谷an酸和氨，利用奈氏試劑檢測(cè)氨增加的速率，即可計(jì)算其酶活性。

試劑組成和配制：

自備儀器和用品：

臺(tái)式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、研缽、甲苯、冰和雙蒸水。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 420nm，蒸餾水調(diào)零。

2、樣品測(cè)定（在 EP 管中加入下列試劑）；

振蕩混勻，室溫放置 15min

混勻，37℃水浴 2 小時(shí)

混勻，8000 g，25℃離心 10 min；取上清液，依次加入下列試劑

注意事項(xiàng)：

混勻，室溫靜置 15min，420nm 處讀取測(cè)定管和對(duì)照管吸光值，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。對(duì)照管只要做一管。

試劑六如出現(xiàn)沉淀，靜置后取上清使用。

酶活性計(jì)算：

用微量石英比色皿測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 3.8488x+0.0057；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值A。單位定義：每 g 土樣每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。

S-GLS（nmol/min/g 土樣）＝(ΔA-0.0057)÷3.8488×V 反總÷W÷T=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。

V 反總：反應(yīng)體系總體積：1.05ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2h=120min；W：樣本質(zhì)量，g; 1000，μmol 到nmol 換算系數(shù)。

用 96 孔板測(cè)定的計(jì)算公式如下

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 1.9244x+0.0057；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/ml），y 為吸光值A。單位定義：每 g 土樣每min 催化谷an酰胺生成 1nmol 氨定義為一個(gè)酶活力單位。

S-GLS（nmol/min/g 土樣）＝(ΔA-0.0057)÷1.9244×V 反總÷W÷T=4.55×(ΔA -0.0057)÷W。

V 反總：反應(yīng)體系總體積：0.525ml；T：反應(yīng)時(shí)間，2h=120min；W：樣本質(zhì)量，g; 1000，μmol 到nmol換算系數(shù)。

土壤谷an酰胺酶活性測(cè)定試劑盒