NobleRyder C9348 Stbl4感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品貨號(hào)：C9348

產(chǎn)品名稱：Stbl4感受態(tài)細(xì)胞

產(chǎn)品規(guī)格：20×100μl

Stbl4感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

儲(chǔ)存條件：-70℃

具體產(chǎn)品的參數(shù)以收到產(chǎn)品說(shuō)明書的參數(shù)為準(zhǔn)

NobleRyder C9348 Stbl4感受態(tài)細(xì)胞來(lái)源于Stbl2 菌株（Stbl2為JM109衍生菌株），用于克隆不穩(wěn)定序列（如重復(fù)序列，逆轉(zhuǎn)錄病毒序列等）和甲基化的DNA序列，特別適合構(gòu)建重組逆轉(zhuǎn)錄病毒或慢病毒質(zhì)粒?？捎糜诖筚|(zhì)粒的構(gòu)建和擴(kuò)增，適用于構(gòu)建和擴(kuò)增質(zhì)粒 cDNA 文庫(kù)。區(qū)別于Stbl2 菌株，Stbl4 菌株在 IPTG和X-gal 存在的條件下，可進(jìn)行α互補(bǔ)原理的藍(lán)白斑篩選實(shí)驗(yàn)。感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率大于108cfu/μg。

基因型:

mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1endA1gyrA96gal-thi-1supE44 λ- relA1 Δ(lac-proAB)/F′ proAB+ lacIqZΔM15 Tn10 (TetR)

菌株抗性：對(duì)氨芐qing霉素，卡na霉素，壯guan霉素敏感；對(duì)四huan素有抗性。

操作方法：（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）

1. 將感受態(tài)細(xì)胞置于冰水浴中化凍。待細(xì)胞剛化凍后，加入質(zhì)粒DNA 或5-10μL連接產(chǎn)物到細(xì)胞中，用手指撥da管底，輕輕混勻；

2. 冰水浴中放置15-30分鐘，不要晃動(dòng)；

3. 42℃熱擊60秒鐘，不要晃動(dòng)；

4. 冰水浴中放置2分鐘，不要晃動(dòng)；

5. 加入500μL無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基；

6. 置于37℃搖床中，150-200rpm 震蕩復(fù)蘇培養(yǎng)60分鐘；

7. 取50-100μL 菌液涂布在含有抗性的 LB 平板上。待液體吸干后，倒置平板，37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。

（當(dāng)克隆不穩(wěn)定片段時(shí)，為了降低重組錯(cuò)誤率，復(fù)蘇培養(yǎng)和涂布培養(yǎng)最好采用 30℃的培養(yǎng)條件，平板在30℃培養(yǎng)時(shí)需要24小時(shí)左右。）

（平板劃線分離法：復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束后，12000rpm 離心 30 秒鐘，棄掉上清，留 100μl 左右的液體，用 200μL吸頭輕輕吹打散菌塊，取10μL重懸的菌液分多點(diǎn)滴在抗性LB平板上，傾斜吸頭，用吸頭頭部的側(cè)面將滴在平板上的液體來(lái)回劃線。37℃培養(yǎng)過(guò)夜。這個(gè)方法可以獲得更多更大的單克隆菌落。）

注意事項(xiàng)：

1．感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。

2．實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來(lái)影響。

3．轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源DNA量過(guò)多或體積過(guò)大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí)DNA體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4．轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板DNA總量。

5．為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最di。

Stbl4感受態(tài)細(xì)胞 載體構(gòu)建 

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C9348 Stbl4感受態(tài)細(xì)胞  20×100μl